Flt3及其突变与白血病的关系

微小残留病变(mini mal residuel disease,MRD)是白血病复发的原因,及时检测并尽早清除MRD,才能降低白血病的复发,达到治愈的目的,f ms样酪氨酸激酶-3(f ms-liketyrosine kinase-3,Flt3)基因在白血病中广泛高表达,并与疾病转归相关,有望成为白血病的泛基因。现将Flt3基因及其突     

Crigler-Najjar综合征Ⅱ型患者及其家系UGT1A1基因突变的分析

目的:分析1例遗传性高非结合胆红素血症Crigler—Najjar综合征Ⅱ型(CN—Ⅱ)患者及其家系尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶基因(UGT1A1)的突变特征,研究其遗传特点和诊断。方法:采用肝功能试验、低热卡试验、肝脏病理组织学和苯巴比妥诱导试验治疗等方法确诊1例CN—Ⅱ,追踪并抽取该先证者及其家系11例成员的外周静脉血,提取基因组DNA,采用聚合酶链反应(PCR)方法扩增UGT1A1基因第1～5外显子基因片段,用直接DNA测序法筛查UGT1A1基因突变。结果:该先证者UGT1A1基因的第5外显子第486密码子发生了T→G碱基的错义突变,导致了酪氨酸变成了天门冬氨酸(Tyr486Asp)。先证者为该突变的纯合子,其父母、妹妹及三位祖父为该突变的杂合子。其余4例未患病成员均未发现UGT1A1基因突变。结论:Tyr486Asp突变是本例CN—Ⅱ家系的致病性基因,该突变不影响UGT1A1基因启动子区苯巴比妥酸的应答元件,其遗传规律符合常染色体隐性遗传。经查询人类基因文库证实,本例CN—Ⅱ基因突变类型在我国是首例,国外尚未见到相同的家系分析报告。     

高通量乙型肝炎病毒YMDD突变区焦磷酸测序方法的建立及其可靠性研究

目的 建立基于焦磷酸测序技术的高通量的乙型肝炎病毒YMDD突变临床检测方法。方法 应用专用的YMDD突变区域的扩增引物，经PCR扩增及磁珠分离，制备YMDD区焦磷酸测序单链模板，并在PSQ96A焦磷酸测序仪上进行焦磷酸测序，应用标准的YMDD区突变质粒作为阳性对照模板和标准品，观察批量分析的可靠性并初步批量检定90例临床血清标本。结果 建立了基于焦磷酸测序技术的YMDD突变检测平台，实现了临床血清标本的高通量检测。能一次获得90人份的YMDD突变临床检测结果。经标准的YMDD突变质粒及血清标本的重复性及可靠性检测，质粒标准品的突变检出率及重复率均达100％，而血清标本达98．8％。结论 本方法可准确．高通量、快速检测YMDD区突变，特别适宜临床批量检测需要。     

结直肠癌患者cdkn2/p16基因异常的检测及临床意义

肿瘤DNA存在于患者血液中，虽然含量极微，但可反映人体对肿瘤的负荷。ckdn2／p16基因是肿瘤抑制基因家族的重要成员，其功能异常多见于各种肿瘤；而其结构异常表现为缺失、点突变及启动子CpG岛的高度甲基化后，使其失活，不能转录和翻译。本研究对同一患者中ckdn2／p16基因几种异常单独或相互作用与病理分型和临床Duke’s分期的相关性进行探讨。     

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶cDNA1311C→T复合11内含子93T→C突变

目的　探讨葡萄糖 6 磷酸脱氢酶 (G6PD)基因cDNA1311C→T复合 11内含子 93T→C的突变与G6PD缺乏的关系。方法　运用硝基四氮唑蓝纸片法筛查G6PD患者 ,以定量法确诊 ,运用PCR SSCP筛查 11外显子异常的标本 ,以突变特异性扩增系统 (ARMS)法鉴定 1311C→T突变 ,DNA直接测序 1311突变标本的 11外显子和 11内含子。结果　在 12例 1311突变的标本中 ,在 11内含子的93位均发现有T→C突变。结论　cDNA1311C→T突变同时合并 11内含子的 93位T→C突变可能是G6PD缺乏患者酶活性降低的原因     

先天性出血性疾病和易栓症的分子缺陷

先天性出血性疾病和易栓症的分子缺陷李家增先天性出血性疾病中最常见的是血友病甲。人们很早就发现了血友病，而且随着凝血试验方法的建立和改进将血友病分为甲、乙、丙三型，并明确了其所缺失的凝血因子。但随着免疫学、生物化学及分子生物学的发展，发现与各型血友病有...     

FLT3基因突变与骨髓增生异常综合征的预后

目的:FLT3跨膜区内部串联重复突变是与白血病发生相关的FLT3基因中最常见的突变类型。本实验旨在探讨FLT3跨膜区内部串联重复突变与骨髓增生异常综合征预后的关系及其临床意义。方法:实验于中国刑警学院法医教研室、沈阳医学院生物化学及分子生物学教研室完成。选择1998-03/2005-10于中国医科大学及沈阳医学院附属医院血液科门诊或住院治疗的患者58例作为实验组,经免疫学、细胞遗传学和分子生物学检查确诊均为骨髓增生异常综合征患者。男37例,女21例,平均年龄19岁,均自愿参加。形态学分型中58例骨髓增生异常综合征患者中难治性贫血13例、难治性贫血伴环状铁粒幼细胞增多4例、难治性贫血伴原始细胞增多20例、转变中的难治性贫血伴原始细胞增多12例、慢性粒-单核细胞性白血病9例。对照组为同期就诊非白血病患者及健康供者10例。①DNA提取:患者骨髓或健康志愿者外周血标本采用淋巴细胞分离液分离单核细胞,传统酚/氯仿/异丙醇法提取DNA。②PCR引物设计:针对FLT3基因内部重复串联结构主要发生在11号外显子,在11号外显子近端和远端分别设计引物11F和11R,扩增产物为133bp。同时设计对照组β-actin引物actin F和actin R,扩增产物为305bp。③PCR扩增及电泳PCR:反应体系包括上、下游引物各0.2μmol/L,dNTPs 0.25mmol/L,Taq DNA聚合酶2.5U,模板DNA 200ng。反应条件为94℃变性3min后进行35个循环,最后72℃延伸10min。取扩增产物,经2%琼脂糖凝胶电泳观察结果。④测序及Blast分析。结果:骨髓增生异常综合征患者58例和对照组10例全部进入结果分析。①58例骨髓增生异常综合征患者中19例FLT3表达阳性,阳性率为32.78%。19例FLT3基因检测阳性患者,有5例出现FLT3跨膜区内部串联重复突变,阳性率为2.74%,其中慢性粒-单核细胞性白血病2例、难治性贫血伴原始细胞过多过度型3例。②测序及Blast比对分析显示,外显子11区均有跨膜区内部串联重复突变,各例的复制区域不同,长短不等(19～39bp)。③临床资料显示,5例伴有FLT3跨膜区内部串联重复突变的髓增生异常综合征患者中有4例在短时期内(1～5个月)转化为急性髓系白血病。结论:髓增生异常综合征患者存在有跨膜区内部串联重复突变。该突变可以作为骨髓增生异常综合征白血病化的重要标志。     

重叠延伸PCR技术定点突变TFEB原核表达载体的构建及体外诱导表达和纯化

目的 基于重叠延伸PCR（SOE PCR）技术构建转录因子EB（TFEB）丝氨酸114位点突变体原核表达质粒,并进行体外诱导表达和纯化。 方法 根据SOE PCR技术原理设计突变引物,以pGEX-6p-1-TFEB质粒为模板,分别采用外侧引物F和R及突变引物F_n和R_n进行第1步PCR扩增,获得含突变位点的产物1和产物2。经第2步PCR退火延伸对产物1和产物2进行重叠拼接,以拼接后DNA片段为模板,采用外侧引物F和R进行第3步PCR扩增获得含突变位点的目的DNA;将其克隆至pGEX-6p-1载体,采用BamH Ⅰ和Sal Ⅰ进行酶切鉴定,DNA测序验证突变结果。于大肠杆菌（E.coli）中分别采用不同浓度异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）在不同条件下诱导TFEB及其突变体重组蛋白表达。Glutathione-Sepharose 4B琼脂糖凝珠分离纯化蛋白,SDS-PAGE凝胶电泳检测纯化产物蛋白浓度和相对分子质量。 结果 第1步PCR扩增获得均含有突变位点的2条DNA片段,经第2步PCR退火延伸和第3步PCR扩增后获得大量含有突变位点的完整DNA片段。双酶切鉴定,连接的DNA片段与目的片段大小一致。DNA测序显示TFEB的114位丝氨酸（TCT）成功突变为丙氨酸（GCT）。在0.5?mmol·L^－1 IPTG、16?℃诱导过夜条件下获得TFEB及其突变体的可溶性蛋白表达。SDS-PAGE凝胶电泳,纯化后蛋白浓度较高,分子大小正确。 结论 利用SOE PCR技术成功实现了TFEB丝氨酸114位点的定点突变,并且TFEB及其突变体基因在E.coli中成功表达。     

非小细胞肺癌非常见突变靶向治疗研究进展

非小细胞肺癌(NSCLC)约占全部肺癌患者的80%～85%。针对NSCLC发生、发展过程中最常见的驱动基因表皮生长因子受体(EGFR)基因突变及间变性淋巴瘤激酶(ALK)融合基因阳性人群靶向药物的研发显著提高了这部分患者的生存期。近些年研究者们发现了NSCLC中除EGFR及ALK外越来越多的非常见基因突变, 如c-ros原癌基因1(ROS1)、BRAF V600E、神经营养因子受体络氨酸激酶1(NTRK1)、人类表皮生长因子受体2(HER2)、间充质上皮转移因子(MET)、原癌基因(RET)、EGFR 20外显子插入以及鼠类肉瘤病毒癌基因(Kras)G12C突变等。针对这些非常见突变的多种靶向药物得以研发并投入临床应用, 其中很多药物已取得了显著的疗效。建议在初诊时对局部晚期或转移性NSCLC患者, 尤其是非鳞NSCLC患者进行可以涵盖非常见突变的基因检测, 对于非常见突变患者采取个体化治疗策略。     

成人朗格汉斯细胞组织细胞增生症11例临床分析

目的 探讨11例成人朗格汉斯细胞组织细胞增生症(LCH)的临床特点及长期随访结果,并结合文献讨论LCH的最新诊治进展。方法 回顾性分析苏州大学附属第一医院2008年1月—2020年7月收治的11例通过病理明确诊断的成人LCH患者的临床分型、受累部位、临床表现、治疗及预后。结果 成人LCH各年龄段均可发病,临床表现与受累部位相关,骨骼(8/11)、淋巴结(4/11)、肺(3/11)受累更为常见;单系统LCH治疗以病灶切除为主,多系统LCH治疗以系统性方案治疗为主。11例患者中失访1例,其余10例中位随访时间为84.8个月,1例死于本病进展,1例死于脑血管意外(LCH完全缓解),其余8例患者无进展且生存至今。结论 成人LCH累及部位及临床表现多样,但经规范化治疗和监测,往往预后较好。